Molekylärbiologi -Molecular biology

Från Wikipedia, den fria encyklopedin

Molekylärbiologi / m ə ˈ l ɛ k j ʊ l ər / är den gren av biologi som försöker förstå den molekylära grunden för biologisk aktivitet i och mellan celler, inklusive molekylär syntes, modifiering, mekanismer och interaktioner. Studiet av biologiska makromolekylers kemiska och fysiska struktur är känd som molekylärbiologi.

Molekylärbiologi beskrevs först som ett tillvägagångssätt fokuserat på grunden för biologiska fenomen - att avslöja strukturerna hos biologiska molekyler såväl som deras interaktioner, och hur dessa interaktioner förklarar observationer av klassisk biologi.

1945 användes termen molekylärbiologi av fysikern William Astbury. Utvecklingen inom området molekylärbiologi skedde mycket sent för att förstå att det komplexa systemet eller fördelaktiga tillvägagångssättet skulle göras på ett enkelt sätt att förstå genom att använda bakterier och bakteriofager denna organism ger information om grundläggande biologiska processer lättare än djurceller. År 1953 gjorde två unga män vid namn Francis Crick och James Watson som arbetade vid Medical Research Council-enheten, Cavendish laboratory, Cambridge (nu MRC Laboratory of Molecular Biology ), en dubbelspiralmodell av DNA som förändrade hela forskningsscenariot de föreslog DNA:t struktur baserad på tidigare forskning gjord av Rosalind Franklin och Maurice Wilkins sedan ledde forskningen till att hitta DNA-material i andra mikroorganismer, växter och djur.

Molekylärbiologi är inte bara studiet av biologiska molekyler och deras interaktioner; snarare är det också en samling av tekniker som utvecklats sedan fältets tillkomst som har gjort det möjligt för forskare att lära sig om molekylära processer. En anmärkningsvärd teknik som har revolutionerat området är polymeraskedjereaktionen (PCR), som utvecklades 1983. PCR är en reaktion som förstärker små mängder DNA, och den används i många tillämpningar över vetenskapliga discipliner, vilket kommer att diskuteras senare .

Den centrala dogmen inom molekylärbiologin beskriver processen där DNA transkriberas till RNA, som sedan översätts till protein.

Molekylärbiologi spelar också en avgörande roll i förståelsen av strukturer, funktioner och interna kontroller inom individuella celler, som alla kan användas för att effektivt rikta nya läkemedel, diagnostisera sjukdomar och bättre förstå cellfysiologi. En del klinisk forskning och medicinska terapier som härrör från molekylärbiologi omfattas av genterapi, medan användningen av molekylärbiologi eller molekylär cellbiologi inom medicin nu kallas molekylär medicin .

Molekylärbiologins historia

Molekylärbiologi sitter i skärningspunkten mellan biokemi och genetik; när dessa vetenskapliga discipliner uppstod och utvecklades under 1900-talet, blev det tydligt att de båda försökte fastställa de molekylära mekanismer som ligger till grund för vitala cellulära funktioner. Framstegen inom molekylärbiologi har varit nära relaterade till utvecklingen av ny teknik och deras optimering. Molekylärbiologi har belysts av många forskares arbete, och därför beror fältets historia på en förståelse av dessa forskare och deras experiment.

Det hela börjar med fenomenet transformation i bakterierna, 1928 observerade Frederick Griffith ett fenomen med transformation från en bakterie till en annan [nu känd som genetisk transformation]. På den tiden kunde han inte förklara fenomenet transformation. Senare 1944 demonstrerade tre forskare Oswald Avery, Colin Macleod och Maclyn McCarty hela fenomenet med transformation i bakterierna. Efter två år 1930 etablerades molekylärbiologi som en officiell vetenskapsgren. Men termen "molekylär biologi" myntades inte förrän 1938 och det gjordes av vetenskapsmannen Warren Weaver, som arbetade som chef för naturvetenskap vid Rockefeller Foundation.

Från följande experiment drogs slutsatsen att DNA är det grundläggande genetiska materialet som orsakade de genetiska förändringarna. Grundläggande sammansättning av DNA var känt att det innehåller fyra baser kända som - Adenin, Guanin, Tymin och Cytosin. Så på grundval av den kemiska sammansättningen och röntgenkristallografin, gjord av Maurice Wilkins och Rosalind Franklin, föreslogs DNA-strukturen av James Watson och Francis Crick. Men innan Watson och Crick föreslog DNA-strukturen, föreslog 1950 den österrikisk födda vetenskapsmannen Erwin Chargaff teorin/regeln [i dag känd som Chargaffs regel], som angav att antalet adenin och tymin och guanin och cytosin är lika. andel.

Chargaffs regel

"Chargaffs regel angav att DNA från vilken art som helst av alla organismer skulle ha ett stökiometriskt förhållande på 1:1 av purin och pyrimidiner (dvs A+G=T+C) och mer specifikt att mängden guanin ska vara lika med cytosin och mängden adenin bör vara lika med tymin . Detta mönster finns i båda strängarna av DNA.

Fältet genetik uppstod som ett försök att förstå de molekylära mekanismerna för genetiskt arv och strukturen hos en gen . Gregor Mendel var pionjär i detta arbete 1866, när han först skrev lagarna för genetiskt arv baserat på sina studier av parningskorsningar i ärtväxter. En sådan lag för genetiskt arv är lagen om segregation, som säger att diploida individer med två alleler för en viss gen kommer att överföra en av dessa alleler till sin avkomma. På grund av hans kritiska arbete kallas studiet av genetiskt arv vanligtvis mendelsk genetik .

En viktig milstolpe inom molekylärbiologin var upptäckten av DNA:s struktur. Detta arbete började 1869 av Friedrich Miescher, en schweizisk biokemist som först föreslog en struktur som kallas nuklein, som vi nu vet är deoxiribonukleinsyra, eller DNA. Han upptäckte detta unika ämne genom att studera komponenterna i pusfyllda bandage, och notera de unika egenskaperna hos de "fosforinnehållande ämnena". En annan anmärkningsvärd bidragsgivare till DNA-modellen var Phoebus Levene, som föreslog "polynukleotidmodellen" av DNA 1919 som ett resultat av hans biokemiska experiment på jäst. 1950 expanderade Erwin Chargaff på Levenes arbete och klargjorde några kritiska egenskaper hos nukleinsyror: för det första varierar sekvensen av nukleinsyror mellan arter. För det andra är den totala koncentrationen av puriner (adenin och guanin) alltid lika med den totala koncentrationen av pyrimidiner (cystein och tymin). Detta är nu känt som Chargaffs regel. 1953 publicerade James Watson och Francis Crick den dubbla spiralformade strukturen av DNA, med hjälp av röntgenkristallografiarbetet gjort av Rosalind Franklin och Maurice Wilkins . Watson och Crick beskrev strukturen av DNA och gissade om konsekvenserna av denna unika struktur för möjliga mekanismer för DNA-replikation.

JD Watson och FHC Crick tilldelades Nobelpriset 1962, tillsammans med Maurice Wilkens, för att ha föreslagit en modell av DNA-strukturen.

Allt eftersom tiden gick upptäckte KA Marcker och Frederick Sanger 1964 ett märkligt amioacyl-tRNA i E.coli, kallat N-formyl-methionyl – tRNA och förklarade att denna molekyl spelar en roll i den speciella mekanismen för kedjeförlängningen. Han tilldelades andra Nobelpriset för att ha upptäckt en komplett sekvens av 5 400 nukleotider av enkelsträngat DNA från F´174-bakteriofager.

1961 visades det att när en gen kodar för ett protein, specificerar tre sekventiella baser av en gens DNA varje successiv aminosyra i proteinet. Den genetiska koden är alltså en triplettkod, där varje triplett (kallat kodon) specificerar en viss aminosyra. Vidare visades att kodonen inte överlappar varandra i DNA-sekvensen som kodar för ett protein, och att varje sekvens läses från en fast utgångspunkt.

Under 1962–1964, genom användningen av villkorliga dödliga mutanter av ett bakterievirus, gjordes grundläggande framsteg i vår förståelse av funktionerna och interaktionerna mellan de proteiner som används i maskineriet för DNA-replikation, DNA-reparation, DNA-rekombination och i sammansättningen av molekylära strukturer.

Diagrammatisk representation av Watson och Cricks DNA-struktur
Vinkelbeskrivning i DNA-struktur

F.Griffith-experimentet

Diagrammatisk representation av experiment

År 1928 mötte Fredrick Griffith en virulensegenskap i pneumokockbakterier, som dödade laboratorieråttor. Enligt Mendel, utbredd vid den tiden, kunde genöverföring endast ske från förälder till dotterceller. Griffith avancerade en annan teori, som säger att genöverföring som sker hos medlemmar av samma generation är känd som horisontell genöverföring (HGT). Detta fenomen kallas nu för genetisk transformation.

Griffith tog upp Streptococcus pneumoniae- bakterien, som hade två olika stammar, en virulent och slät och en avirulent och grov. Den släta stammen hade ett glittrande utseende på grund av närvaron av en typ av specifik polysackarid - en polymer av glukos och glukuronsyrakapsel. På grund av detta polysackaridskikt av bakterier kan en värds immunsystem inte känna igen bakterierna och det dödar värden. Den andra, avirulenta, grova stammen saknar denna polysackaridkapsel och har ett matt, strävt utseende.

Närvaro eller frånvaro av kapsel i stammen är känt för att vara genetiskt betingad. Släta och grova stammar förekommer i flera olika typer såsom SI, S-II, S-III, etc. och RI, R-II, R-III, etc. respektive. Alla dessa undertyper av S- och R-bakterier skiljer sig från varandra i antigentyp de producerar.

Hershey och Chase experimenterar

Hershey och Chase experimenterar

Bekräftelsen på att DNA är det genetiska materialet som är orsaken till infektionen kom från Hershey och Chase experiment. De använde E.coli och bakteriofag för experimentet. Detta experiment är också känt som mixerexperiment, eftersom köksmixer användes som en viktig apparat. Alfred Hershey och Martha Chase visade att DNA som injicerats av en fagpartikel i en bakterie innehåller all information som krävs för att syntetisera avkommans fagpartiklar. De använde radioaktivitet för att märka bakteriofagens proteinhölje med radioaktivt svavel och DNA med radioaktivt fosfor, i två olika provrör. Efter att ha blandat in bakteriofag och E.coli i provröret startar inkubationsperioden där fagen omvandlar det genetiska materialet i E.coli- cellerna. Sedan blandas eller omrörs blandningen, vilket separerar fagen från E.coli- celler. Hela blandningen centrifugeras och pelleten som innehåller E. coli- celler kontrollerades och supernatanten kasserades. E.coli - cellerna visade radioaktivt fosfor, vilket indikerade att det transformerade materialet var DNA och inte proteinhöljet.

Det transformerade DNA:t fästs till DNA från E.coli och radioaktivitet ses endast på bakteriofagens DNA. Detta muterade DNA kan överföras till nästa generation och teorin om transduktion kom till. Transduktion är en process där bakteriens DNA bär fragmentet av bakteriofager och skickar det vidare till nästa generation. Detta är också en typ av horisontell genöverföring.

Modern molekylärbiologi

När vi närmar oss mitten av 20-talet går molekylärbiologin in i en guldålder definierad av både vertikal och horisontell teknisk utveckling. Vertikalt tillåter nya teknologier realtidsövervakning av biologiska processer på atomnivå. Molekylärbiologer har idag tillgång till allt mer överkomliga sekvenseringsdata på allt högre djup, vilket underlättar utvecklingen av nya genetiska manipulationsmetoder i nya icke-modellorganismer. Likaså kommer syntetiska molekylärbiologer att driva den industriella produktionen av små och makromolekyler genom införandet av exogena metaboliska vägar i olika prokaryota och eukaryota cellinjer.

Horisontellt blir sekvenseringsdata mer överkomligt och används inom många olika vetenskapliga områden. Detta kommer att driva på utvecklingen av industrier i utvecklingsländer och öka tillgängligheten för enskilda forskare. På samma sätt kan CRISPR-Cas9 genredigeringsexperiment nu tänkas ut och implementeras av individer för under 10 000 USD i nya organismer, vilket kommer att driva utvecklingen av industriella och medicinska applikationer

Förhållande till andra biologiska vetenskaper

Schematiskt samband mellan biokemi, genetik och molekylärbiologi

Följande lista beskriver en syn på de tvärvetenskapliga sambanden mellan molekylärbiologi och andra relaterade områden.

Medan forskare utövar tekniker som är specifika för molekylärbiologi är det vanligt att kombinera dessa med metoder från genetik och biokemi . Mycket av molekylärbiologin är kvantitativ, och nyligen har en betydande mängd arbete gjorts med hjälp av datavetenskapliga tekniker som bioinformatik och beräkningsbiologi . Molekylär genetik, studiet av genstruktur och funktion, har varit bland de mest framträdande underområdena inom molekylärbiologin sedan början av 2000-talet. Andra grenar av biologin är informerade av molekylärbiologin, antingen genom att direkt studera interaktionerna mellan molekyler i sin egen rätt, såsom inom cellbiologi och utvecklingsbiologi, eller indirekt, där molekylära tekniker används för att härleda historiska attribut för populationer eller arter, som i fält inom evolutionsbiologi som populationsgenetik och fylogenetik . Det finns också en lång tradition av att studera biomolekyler "från grunden", eller molekylärt, inom biofysik .

Tekniker för molekylärbiologi

DNA-animation

Molekylär kloning

Transduktionsbild

Molekylär kloning används för att isolera och sedan överföra en DNA-sekvens av intresse till en plasmidvektor. Denna rekombinanta DNA-teknik utvecklades först på 1960-talet. I denna teknik klonas en DNA- sekvens som kodar för ett protein av intresse med användning av polymeraskedjereaktion (PCR), och/eller restriktionsenzymer, in i en plasmid ( expressionsvektor ). Plasmidvektorn har vanligtvis minst tre särskiljande egenskaper: ett replikationsursprung, ett multipelt kloningsställe (MCS) och en selektiv markör (vanligtvis antibiotikaresistens ). Uppströms om MCS finns dessutom promotorregionerna och transkriptionsstartstället, som reglerar uttrycket av klonad gen.

Denna plasmid kan sättas in i antingen bakterie- eller djurceller. Införande av DNA i bakterieceller kan göras genom transformation via upptag av naket DNA, konjugering via cell-cell-kontakt eller genom transduktion via viral vektor. Att introducera DNA i eukaryota celler, såsom djurceller, på fysisk eller kemisk väg kallas transfektion . Flera olika transfektionstekniker finns tillgängliga, såsom kalciumfosfattransfektion, elektroporering, mikroinjektion och liposomtransfektion . Plasmiden kan integreras i genomet, vilket resulterar i en stabil transfektion, eller kan förbli oberoende av genomet och uttryckas tillfälligt, kallad en transient transfektion.

DNA som kodar för ett protein av intresse finns nu inuti en cell, och proteinet kan nu uttryckas. En mängd olika system, såsom inducerbara promotorer och specifika cellsignaleringsfaktorer, är tillgängliga för att hjälpa till att uttrycka proteinet av intresse vid höga nivåer. Stora mängder av ett protein kan sedan extraheras från den bakteriella eller eukaryota cellen. Proteinet kan testas för enzymatisk aktivitet under en mängd olika situationer, proteinet kan kristalliseras så att dess tertiära struktur kan studeras, eller, inom läkemedelsindustrin, kan aktiviteten av nya läkemedel mot proteinet studeras.

Polymeraskedjereaktion

Polymeraskedjereaktion (PCR) är en extremt mångsidig teknik för att kopiera DNA. I korthet tillåter PCR att en specifik DNA-sekvens kan kopieras eller modifieras på förutbestämda sätt. Reaktionen är extremt kraftfull och kan under perfekta förhållanden förstärka en DNA-molekyl till att bli 1,07 miljarder molekyler på mindre än två timmar. PCR har många tillämpningar, inklusive studiet av genuttryck, detektion av patogena mikroorganismer, detektion av genetiska mutationer och introduktion av mutationer i DNA. PCR-tekniken kan användas för att introducera restriktionsenzymställen till ändarna av DNA-molekyler, eller för att mutera speciella baser av DNA, det senare är en metod som kallas platsriktad mutagenes . PCR kan också användas för att fastställa om ett visst DNA-fragment finns i ett cDNA-bibliotek . PCR har många variationer, som omvänd transkriptions-PCR ( RT-PCR ) för amplifiering av RNA och, på senare tid, kvantitativ PCR som möjliggör kvantitativ mätning av DNA- eller RNA-molekyler.

Två procent agarosgel i boratbuffert gjuten i en gelbricka.

Gelelektrofores

SDS-SIDA

Gelelektrofores är en teknik som separerar molekyler efter deras storlek med hjälp av en agaros- eller polyakrylamidgel. Denna teknik är ett av de viktigaste verktygen för molekylärbiologi. Grundprincipen är att DNA-fragment kan separeras genom att applicera en elektrisk ström över gelén - eftersom DNA-ryggraden innehåller negativt laddade fosfatgrupper kommer DNA:t att vandra genom agarosgelen mot den positiva änden av strömmen. Proteiner kan också separeras på basis av storlek med hjälp av en SDS-PAGE- gel, eller på basis av storlek och deras elektriska laddning genom att använda vad som kallas en 2D-gelelektrofores .

Proteiner färgade på en PAGE-gel med Coomassie blue-färgämne.

Bradford-analysen

Bradford Assay är en molekylärbiologisk teknik som möjliggör snabb, exakt kvantifiering av proteinmolekyler med användning av de unika egenskaperna hos ett färgämne som kallas Coomassie Brilliant Blue G-250. Coomassie Blue genomgår ett synligt färgskifte från rödbrun till klarblått vid bindning till protein. I sitt instabila, katjoniska tillstånd har Coomassie Blue en bakgrundsvåglängd på 465 nm och ger ifrån sig en rödbrun färg. När Coomassie Blue binder till protein i en sur lösning skiftar bakgrundsvåglängden till 595 nm och färgen ger ifrån sig en klar blå färg. Proteiner i analysen binder Coomassie-blått på cirka 2 minuter och protein-färgämneskomplexet är stabilt i cirka en timme, även om det rekommenderas att absorbansavläsningar görs inom 5 till 20 minuter efter reaktionsstart. Koncentrationen av protein i Bradford-analysen kan sedan mätas med en spektrofotometer för synligt ljus och kräver därför ingen omfattande utrustning.

Denna metod utvecklades 1975 av Marion M. Bradford och har möjliggjort betydligt snabbare, mer exakt proteinkvantifiering jämfört med tidigare metoder: Lowry-proceduren och biuretanalysen. Till skillnad från de tidigare metoderna är Bradford-analysen inte känslig för interferens av flera icke-proteinmolekyler, inklusive etanol, natriumklorid och magnesiumklorid. Det är dock känsligt för påverkan av starka alkaliska buffrande medel, såsom natriumdodecylsulfat (SDS).

Makromolekylblotting och sondering

Termerna northern, western och eastern blotting härleds från vad som ursprungligen var ett molekylärbiologiskt skämt som spelade på termen Southern blotting, efter den teknik som beskrevs av Edwin Southern för hybridisering av blottat DNA. Patricia Thomas, utvecklare av RNA-blotten som sedan blev känd som Northern blot, använde faktiskt inte termen.

Southern blotting

Uppkallad efter sin uppfinnare, biologen Edwin Southern, är Southern blot en metod för att undersöka förekomsten av en specifik DNA-sekvens i ett DNA-prov. DNA-prover före eller efter restriktionsenzym (restriktionsendonukleas) digestion separeras genom gelelektrofores och överförs sedan till ett membran genom blotting via kapillärverkan . Membranet exponeras sedan för en märkt DNA-sond som har en komplementbassekvens till sekvensen på DNA:t av intresse. Southern blotting används mindre vanligt inom laboratorievetenskap på grund av förmågan hos andra tekniker, såsom PCR, att detektera specifika DNA-sekvenser från DNA-prover. Dessa blottar används fortfarande för vissa applikationer, till exempel för att mäta antalet transgenkopior i transgena möss eller vid konstruktionen av embryonala stamcellinjer för genknockout .

Northern blotting

Northern blot-diagram

Northern blot används för att studera närvaron av specifika RNA-molekyler som relativ jämförelse mellan en uppsättning olika prover av RNA. Det är i huvudsak en kombination av denaturerande RNA-gelelektrofores och en blöt . I denna process separeras RNA baserat på storlek och överförs sedan till ett membran som sedan sonderas med ett märkt komplement av en sekvens av intresse. Resultaten kan visualiseras på en mängd olika sätt beroende på vilken etikett som används; emellertid resulterar de flesta i avslöjandet av band som representerar storlekarna på RNA som detekteras i provet. Intensiteten hos dessa band är relaterad till mängden mål-RNA i de analyserade proverna. Proceduren används vanligtvis för att studera när och hur mycket genuttryck som sker genom att mäta hur mycket av det RNA:t som finns i olika prover, förutsatt att ingen post-transkriptionell reglering sker och att nivåerna av mRNA återspeglar proportionella nivåer av motsvarande protein. produceras. Det är ett av de mest grundläggande verktygen för att bestämma vid vilken tidpunkt och under vilka förhållanden vissa gener uttrycks i levande vävnader.

Western blotting

En western blot är en teknik genom vilken specifika proteiner kan detekteras från en blandning av proteiner. Western blots kan användas för att bestämma storleken på isolerade proteiner, såväl som för att kvantifiera deras uttryck. I western blotting separeras proteiner först efter storlek, i en tunn gel inklämd mellan två glasplattor i en teknik som kallas SDS-PAGE . Proteinerna i gelén överförs sedan till ett polyvinylidenfluorid (PVDF), nitrocellulosa, nylon eller annat stödmembran. Detta membran kan sedan sonderas med lösningar av antikroppar . Antikroppar som specifikt binder till proteinet av intresse kan sedan visualiseras med en mängd olika tekniker, inklusive färgade produkter, kemiluminescens eller autoradiografi . Ofta är antikropparna märkta med enzymer. När ett kemiluminiscerande substrat exponeras för enzymet tillåter det detektering. Att använda western blotting-tekniker tillåter inte bara detektion utan även kvantitativ analys. Analoga metoder till western blotting kan användas för att direkt färga specifika proteiner i levande celler eller vävnadssnitt .

Östra blotting

Eastern blotting - tekniken används för att detektera post-translationell modifiering av proteiner. Proteiner blottade på PVDF- eller nitrocellulosamembranet undersöks för modifieringar med användning av specifika substrat.

Mikroarrayer

En DNA-mikroarray skrivs ut
Hybridisering av mål till sond

En DNA-mikroarray är en samling fläckar fästa på ett fast underlag, såsom ett objektglas där varje fläck innehåller ett eller flera enkelsträngade DNA- oligonukleotidfragment . Arrayer gör det möjligt att lägga ner stora mängder mycket små (100 mikrometer diameter) fläckar på ett enda objektglas. Varje fläck har en DNA-fragmentmolekyl som är komplementär till en enda DNA-sekvens . En variant av denna teknik gör det möjligt att kvalificera genuttrycket av en organism i ett särskilt utvecklingsstadium ( uttrycksprofilering ). I denna teknik isoleras RNA:t i en vävnad och omvandlas till märkt komplementärt DNA (cDNA). Detta cDNA hybridiseras sedan till fragmenten på arrayen och visualisering av hybridiseringen kan göras. Eftersom flera arrayer kan göras med exakt samma position av fragment, är de särskilt användbara för att jämföra genuttrycket av två olika vävnader, såsom en frisk och cancerös vävnad. Man kan också mäta vilka gener som uttrycks och hur det uttrycket förändras med tiden eller med andra faktorer. Det finns många olika sätt att tillverka mikroarrayer; de vanligaste är kiselchips, objektglas med fläckar på ~100 mikrometer i diameter, anpassade arrayer och arrayer med större fläckar på porösa membran (makroarrayer). Det kan finnas allt från 100 platser till mer än 10 000 på en given array. Arrayer kan också göras med andra molekyler än DNA.

Allelspecifik oligonukleotid

Allel-specifik oligonukleotid (ASO) är en teknik som tillåter detektion av singelbasmutationer utan behov av PCR eller gelelektrofores. Korta (20–25 nukleotider långa), märkta sönder exponeras för det icke-fragmenterade mål-DNA:t, hybridisering sker med hög specificitet på grund av probernas korta längd och även en enda basförändring kommer att hindra hybridisering. Mål-DNA tvättas sedan och de märkta proberna som inte hybridiserade tas bort. Mål-DNA:t analyseras sedan med avseende på närvaron av sonden via radioaktivitet eller fluorescens. I detta experiment, som i de flesta molekylärbiologiska tekniker, måste en kontroll användas för att säkerställa framgångsrika experiment.

Inom molekylärbiologin utvecklas procedurer och tekniker kontinuerligt och äldre teknologier överges. Till exempel, före tillkomsten av DNA- gelelektrofores ( agaros eller polyakrylamid ), bestämdes storleken på DNA-molekyler typiskt genom hastighetssedimentering i sackarosgradienter, en långsam och arbetsintensiv teknik som kräver dyr instrumentering; före sackarosgradienter användes viskometri . Bortsett från deras historiska intresse är det ofta värt att känna till äldre teknik, eftersom det ibland är användbart att lösa ett annat nytt problem för vilket den nyare tekniken är olämplig.

Se även

Referenser

Vidare läsning

externa länkar